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柑桔黃龍病病原培養(yǎng)及免疫診斷

84農(nóng)業(yè)網(wǎng)   時(shí)間:2018-03-14    作者:佚名    來源:網(wǎng)絡(luò)整理

該技術(shù)針對(duì)柑桔的毀滅性病害黃龍病,對(duì)黃龍病類細(xì)菌進(jìn)行分離培養(yǎng),研制半合成培養(yǎng)基的配方,制定了從病葉葉脈分離BLO的培養(yǎng)方法,建立了BLO分離培養(yǎng)技術(shù)。用人工培養(yǎng)的BLO活菌或BLO蛋白免疫小鼠(或家兔)制得單克隆抗體及免疫血清,并創(chuàng)立了下列4種免疫診斷方法:①酶聯(lián)免疫吸附分析法(ELISA),即用辣根過氧化物酶標(biāo)記單克隆抗體,以聯(lián)苯二胺為顯色劑,將柑桔葉子的勻漿作材料,3天內(nèi)可得正確結(jié)果;②酶標(biāo)免疫定位法,即用辣根過氧化物酶標(biāo)記單克隆抗體,以聯(lián)苯二胺為顯色劑,將柑桔葉子的葉脈徒手切片作材料,此法為定性分析,l.5天內(nèi)可得結(jié)果;②熒光抗體檢驗(yàn)法,即用培養(yǎng)病原的免疫血清或單克隆抗體作第一抗體,以異硫氰熒光素(FITC)標(biāo)記的IgG(羊抗鼠或羊抗兔)作第二抗體,將柑桔葉子的葉脈作徒手切片為材料,此法屬定性分析方法;④膠體金一銀標(biāo)記免疫檢測(cè)法,即用膠體金標(biāo)記免疫血清或單克隆抗體,以硝酸銀作染色劑,將柑桔葉子的葉脈徒手切片作材料,也屬定性分析方法,在6小時(shí)內(nèi)完成檢測(cè)。上述技術(shù)實(shí)現(xiàn)了柑桔發(fā)病前的預(yù)知診斷,防止了病害流行,提高了果樹的生產(chǎn)能力。

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